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產(chǎn)物電泳實(shí)驗(yàn)步驟

發(fā)布時(shí)間:2015/5/11點(diǎn)擊次數(shù):1263

實(shí)驗(yàn)材料和試劑
  (一)實(shí)驗(yàn)樣品
  PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
  (二)試劑
  1.l DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) (天根生物科技有限公司)
    2.1mg/ml溴化乙錠溶液 (碧云天)
3.電泳緩沖液(TAE)(碧云天)
    40 mmol/L   Tris-乙酸
    1 mol/L     EDTA
4.2.5% 瓊脂糖凝膠
(配制方法:稱取瓊脂糖2.5克,加入100ml TAE電泳緩沖液)
  (三)儀器
  微量移液器                天能電泳儀
  天能水平電泳槽            天能透射紫外觀察儀

實(shí)驗(yàn)步驟
  1.選擇合適的水平式電泳槽,調(diào)節(jié)電泳槽平面至水平。檢查穩(wěn)壓電源與正負(fù)極的線路。
  2.選擇孔徑大小合適的點(diǎn)樣梳子,垂直架在電泳膠模的一端,使點(diǎn)樣梳子底部離電泳膠模底部的距離為1.0mm。
  3.制備2.5%瓊脂糖凝膠,100℃水浴加熱至瓊脂糖融化均勻。
  4.用吸管取少量瓊脂糖凝膠溶液將電泳膠模四周密封好,防止?jié)补喹傊悄z板時(shí)發(fā)生滲透。待瓊脂糖凝膠冷卻至60℃左右時(shí),加入一滴溴化乙錠,搖勻,輕輕倒入電泳膠模中,瓊脂糖凝膠的厚度在3~5mm。倒膠時(shí)要避免產(chǎn)生氣泡,若有氣泡可用吸管小心吸去。
  5.瓊脂糖凝膠凝固后,在室溫放置20分鐘,小心拔掉點(diǎn)樣梳子和電泳膠模兩端的擋板,保持點(diǎn)樣孔的完好。
  6.將電泳膠模放入電泳槽中,加入電泳緩沖液,使電泳緩沖液面高出瓊脂糖凝膠表面1~2mm。如點(diǎn)樣孔內(nèi)有氣泡,用吸管小心吸出,以免影響加樣。
  7.將15ulDNA樣品與1/5體積的溴酚藍(lán)指示劑點(diǎn)樣緩沖液混合。上樣緩沖液不僅可以提高樣品的密度,使樣品均勻沉到樣品孔內(nèi),還可以使樣品帶顏色,便于上樣和估計(jì)電泳時(shí)間和判斷電泳的位置。
  8.用微量移液器將樣品5ul小心加入加樣孔內(nèi),記錄樣品點(diǎn)樣秩序。
  9.蓋上電泳槽,開啟電源開關(guān),高電壓不超過(guò)5V/cm(100~150V恒壓電泳),使DNA從負(fù)極向正極移動(dòng)。
  10. 電泳1小時(shí),電泳完畢后關(guān)閉電源,戴一次性塑料手套取出凝膠,盡可能將的電泳緩沖液淋干,在254nm波長(zhǎng)的透射紫外燈下觀察。


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